Afro Samurai:
Nachdem Afro der Träger des Stirnbandes Nr. 1 geworden ist, wollte er ein Ruhiges Leben führen. Dieses wurde ihm jedoch Verwehrt durch einen Angriff von Sio und Jinno.
Die beiden wollten sich Rächen und nahmen den Kopf von Afros Vater mit um ihn wieder zum Leben zu erwecken. Afro ging los und holte sich das Stirnband Nr. 2 um damit Sio herausfordern zu können.
Ninja Ninja:
Nachdem Ninja Ninja verschwunden war, tauchte er erst wieder auf als Afro auf dem Weg war sich das Stirnband Nr. 2 zu holen.
Er ist ein Plapperndes Nervenbündel und ist ein alter Ego von Afro. Dieser Ignoriert ihn die Meiste zeit. Das einzige was er zu ihm mal sagt ist: „Halts Maul“. Ninja Ninja Taucht meistens dann auf wen Gefahr aufkommt oder wenn er Verfolgt wird.
Jinno:
Nach den Ereignissen aus der Serie ist Jinno ein sehr Schweigsamer Kerl geworden. Er Zeigt keime Emotionen mehr und ist endgültig mehr Cyborg als Mensch.
Sio:
Sio ist wunderschön und Sexy. Sie ist begabt in der Kunst des Schwertkampfes. Jinno ist ihr Bruder. Als Kind wurde sie in eine Reiche Familie aufgenommen. In dem Moment wo ihre Familie auf Grund von Afros Taten starb, überlebte sie irgendwie und schwor sich daraufhin Rache an Afro Samurai. Mit Hilfe von Jinno und Dharman Schafte sie es, Afro das Stirnband Nr. 1 zu nehmen und den Kopf seines Vaters. Diesen lies sie von Dharman zu neuem Leben erwecken um sich so an Afro zu Rächen.
Tomoe:
Sie ist eine von Sios Beschützern die zu ihrer Adoptivfamilie gehört.
In Sios Kindheit war sie ein Fröhlicher Mensch, der sie das Tanzen und Instrumente spielen beibrachte.
Nach dem Vorfall in der Stadt, starb sie und wurde von Dharman wieder belebt. Seitdem ist sie eine der drei Beschützer von Sio und will Afro Töten.
Michael:
Er ist einer von Sios Beschützern der zu ihrer Adoptivfamilie gehört.
In Sios Kindheit trug er immer ein Drachenkostüm um alle zu erheitern.
Nach dem Vorfall in der Stadt, starb er und wurde von Dharman wieder belebt. Seitdem ist er einer der drei Beschützer von Sio und will Afro Töten.
Bin:
Er ist einer von Sios Beschützern der zu ihrer Adoptivfamilie gehört.
In Sios Kindheit hat Bin immer alle zum Lachen gebracht mit seiner Maskerade.
Nach dem Vorfall in der Stadt starb er und wurde von Dharman wieder belebt. Seitdem ist er einer der drei Beschützer von Sio und will Afro Töten.
Dharman:
Dharman ist ein Cyborg aber auch ein Genialer und zugleich Verrückter Wissenschaftler. Er will Afros Vater neues Leben geben.
Bruder 3:
Er ist der Besitzer eines Spielcasinos. Als Afro ihn besucht um den Namen vom Träger des Stirnbandes NR. 2 zu erhalten, will er ihn in einem Würfelspiel übers Ohr hauen.
Shichigoro:
Er ist der Träger des Stirnbandes Nr.2 und ein Begabter Schwertkämpfer. Er hat außerdem einen Adoptivsohn namens Kotaro. Im Gegensatz zu vielen anderen Trägern, wollte Shichigoro den Kampf stoppen und verteidigte das Stirnband Nr. 2 damit das ganze ein Ende hat.
Kotaro:
Kotaro ist Shichigoros Adoptivsohn. Er Wurde von Afro gerettet als er von Banditen verfolgt wurde. Als er zusah wie Afro seinen Vater tötete, nahm er sein Schwert und Schwor sich Rache an Afro Samurai.
Justice:
Nachdem er anscheinend Getötet wurde, taucht er im Film gegen Ende erneut und in einer neuen Gestallt auf.